更新時間:2022-08-11
“人巨噬細胞炎性蛋白2"由上海恒遠生物專業(yè)提供,有96T和48T兩種規(guī)格,包括96/48孔酶標包被板、酶標試劑、樣品稀釋液、顯色劑AB液、標準品、濃縮洗滌液,封板膜,說明書等。
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產(chǎn)品名稱:人巨噬細胞炎性蛋白2
英文名稱:Human macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標本齊全:血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
運輸條件低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸。
巨噬細胞(Macrophages)能夠吞沒、破壞受損傷組織,有助于啟動康復(fù)過程。雖然它們在損傷位點發(fā)揮關(guān)鍵作用,但一旦任務(wù)完成,就需要盡快撤離,結(jié)束炎癥反應(yīng),為再生過程開路。繼續(xù)存在的巨噬細胞不利于組織恢復(fù)。
巨噬細胞
盡管研究人員對于啟動巨噬細胞的分子機制研究的比較透徹,但關(guān)于其退出損傷位點的過程還了解甚少。研究人員鑒別出一清除外周神經(jīng)損傷位點巨噬細胞的關(guān)鍵環(huán)節(jié),對弄清脊髓損傷、中風和多發(fā)性硬化中相似的分子機制提供了重要線索。已知Nogo細胞受體家族與神經(jīng)細胞生長有關(guān),SamuelDavid等觀測Nogo家族成員NgR1的作用。NgR1類受體是位于細胞膜上的蛋白開關(guān),受到特異化學信號或配體刺激后,誘導細胞反應(yīng)。
破壞大鼠、小鼠的大腿坐骨神經(jīng),觀察NgR1在修復(fù)過程中的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)巨噬細胞到達損傷位點后,細胞表面會表達NgR1。進一步研究發(fā)現(xiàn),受損神經(jīng)合成髓磷脂時,NgR1不僅阻止巨噬細胞與髓磷脂結(jié)合,而且直接排斥正在形成過程中的髓磷脂,若抑制髓磷脂再生,巨噬細胞會停留在損傷位點周圍。zui終,研究人員在髓磷脂上鑒別出特異激發(fā)排斥反應(yīng)的分子??蓱?yīng)用于外周神經(jīng)以外的神經(jīng)(中樞神經(jīng)),他們發(fā)現(xiàn)中風、多發(fā)性硬化和脊髓損傷過程中激活的巨噬細胞,表面都會表達NgR1。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。
(一)原理
ELISA是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
(二)操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。
2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
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