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p-AKT,大鼠磷酸化AKT蛋白ELISA試劑盒原理

更新時間:2022-08-28

簡要描述:

p-AKT,大鼠磷酸化AKT蛋白ELISA試劑盒原理用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠磷酸化AKT蛋白(p-AKT)的含量。

型號:點擊量:769

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產(chǎn)品資料:

 規(guī)    格 (48T/96T)

 樣品類型  血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清等樣品類型

 檢測方法  酶聯(lián)免疫法

 特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性

 交叉反應(yīng)  由于當前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識有限,現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此,交叉反應(yīng)可能仍然存在

 樣 本 量  50-100 μL

 實驗時間  1–4.5h

 儲存條件  2-8°C

 儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達1個月(專家建議:4°C恒溫保存,酶免試劑盒實驗效果更佳)。對于長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋,避免潮濕

 有 效 期  6 months

原理
  ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。

類型
  ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:

雙抗體夾心法測抗原

  雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2) 加受檢標本,保溫反應(yīng)。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3) 加酶標抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關(guān)。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應(yīng),作一步檢測。
  在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,此時反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結(jié)果將低于實際的含量,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴重時,反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應(yīng)注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
  假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物。但在HBsAg的檢測中應(yīng)注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)性,這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問題。
  雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風(fēng)濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結(jié)合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結(jié)合,表現(xiàn)出假陽性反應(yīng)。采用F(ab')或Fab片段作酶結(jié)合物的試劑,由于去除了Fc段,從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標。
  雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。

樣品要求

·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。

·檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿。

·樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存,若長期保存應(yīng)-70℃。

·樣本量的要求:若一個指標做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul,做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建 議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

·客戶的樣本收集后,立即按要求保存,切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與溝通確認。

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