平滑肌細胞的生物學特性培養(yǎng)技術(shù)

1 平滑肌細胞的生物學特性
1.1平滑肌細胞生長過程：不同種類的平滑肌細胞培養(yǎng)具有相似的生長過程。貼塊法培養(yǎng)的平滑肌細胞，3～7d開始以垂直方向從組織塊邊緣遷移萌出；6～7d細胞進入對數(shù)生長期；7～10d當組織塊中大部分細胞萌出后，組織塊便自行脫離，其周圍細胞密度更加增大，部分區(qū)域細胞相互接觸交替生長，出現(xiàn)“峰-谷”結(jié)構(gòu)（峰：即多層細胞丘，可達8～10層，谷：即稀疏排列的單層細胞處，甚至無細胞處），這是平滑肌細胞的特征性生長表現(xiàn)；10～14d細胞相互融合。傳代細胞的生長特性與原代細胞基本相同，細胞傳代的間隔期一般為6～9d，傳代開始時細胞呈圓形，不透明，邊緣清楚，而后逐漸伸展貼壁，透明度增高，周界不清，呈典型“峰-谷”樣生長。
酶消化法培養(yǎng)的平滑肌細胞，培養(yǎng)1d后，大部分細胞已貼壁，換液后繼續(xù)培養(yǎng)3d，貼壁細胞*伸展，多數(shù)呈長梭型，細胞伸出較長的突起相互接觸，部分區(qū)域可見典型的“峰-谷”結(jié)構(gòu)，培養(yǎng)7～9d細胞鋪滿瓶底。培養(yǎng)細胞達鋪滿狀態(tài)所需時間與細胞活力和細胞接種密度有關(guān)，細胞活力愈大，接種密度愈大，達到鋪滿狀態(tài)所需時間愈短。
1.2平滑肌細胞形態(tài)學特征：許多研究證實，體外培養(yǎng)的平滑肌細胞具有與體內(nèi)平滑肌細胞相同的形態(tài)學特征。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，未貼壁前細胞呈圓形或橢圓形，胞質(zhì)密度高，不透明，胞核多為卵圓形，有多個核仁，貼壁后細胞胞質(zhì)透明，彼此融合在一起，細胞呈梭形或多角形，核居中央，呈橢圓形。透射電鏡下觀察，細胞呈不規(guī)則形態(tài)，核呈鋸齒狀，胞漿內(nèi)含平滑肌細胞特征性結(jié)構(gòu)肌絲和密體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，游離核糖體豐富，基膜下有密斑。掃描電鏡下可見細胞呈帶狀，平行排列，細胞周邊常發(fā)出許多絲狀突起與相鄰細胞的絲狀突起交織成網(wǎng)狀。此外，在細胞表面還可見許多疏密不等的小泡，可能為平滑肌細胞收縮運動時胞漿外突的形態(tài)表現(xiàn)。
2 平滑肌細胞培養(yǎng)技術(shù)
有文獻認為組織塊+酶消化法，能夠縮短培養(yǎng)時間，更易獲得大量較純的原代細胞，方法是：將剪碎的平滑肌組織塊用0.1%膠原酶37℃消化 0.5～1h后，再接種于培養(yǎng)瓶壁上，37℃培養(yǎng)箱中靜置2～4h，待組織塊貼壁牢固后，再補加含胎牛血清的培養(yǎng)液，37℃繼續(xù)靜置培養(yǎng)。此種方法細胞游出貼壁時間比傳統(tǒng)組織塊法短1～2d，可能是由于組織塊被膠原酶消化后其細胞間質(zhì)變得疏松，細胞容易掙脫間質(zhì)束縛而萌出的緣故[6] （唐槐靜，段勝仲，等。胎兒動脈平滑肌細胞培養(yǎng)方法的研究。湖北醫(yī)科大學學報，1999，20（2）：89）
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