葡聚糖凝膠 LH-20

適合用于有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子，天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化。可以非常經(jīng)濟(jì)的大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物，尤其在中藥有效成分提取中作為大孔吸附樹脂解析物的純化。 結(jié)合凝膠過濾﹑分配色譜及吸附層析于一身，能分離結(jié)構(gòu)相近的分子。因此使用中要考略幾種色譜的作用機(jī)制。

zui高載量可達(dá)250mg樣品/ml凝膠﹑極少需要再生﹑使用得當(dāng)，分離效果可保持不變。

上樣量視被分離物的結(jié)構(gòu)性能的差異而定：差異大，則大；差異小，則小。凝膠過濾的上樣量一般為5-7％的床體積，我們建議初次上樣量控制在1-2％的床體積，視分離情況可以逐步增加；柱高的選擇也與分離要求相關(guān)——難分物質(zhì)要有一定柱高和流速控制；流動相可參考TLC的條件，正確的流動相可以提高分離度并縮短分離時間。

流動相的常用溶劑為：水、甲醇、、乙酸乙酯、。

上述溶劑的極性依次降低，對帶有極性的被分離物而言，保留值和分離度依次遞增；同理選用的凝膠柱高可依次降低，流速可以增大（或上樣量可以增加，樹脂體積在低極性溶劑中明顯收縮）。

溶劑的溶解性，極性，沸點，毒性都是要考慮到的，二氯甲烷通常對被分離物質(zhì)間的極性和堿性差異比較小時采用。甲醇通常對帶環(huán)狀（包括苯環(huán)）物質(zhì)分離采用，葡聚糖凝膠對環(huán)狀物質(zhì)有強(qiáng)烈吸附。LH-20同時具備親水和親脂雙重性質(zhì)，且被分離物質(zhì)的極性在分離過程中起著重要作用。

1 葡聚糖凝膠LH-20的原理

葡聚糖凝膠LH-20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因為凝膠過濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來，小分子的化合物保留強(qiáng)，zui后出柱。如果使用反相溶劑洗脫，葡聚糖凝膠LH-20對化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來，極性小的化合物保留強(qiáng)，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過濾作用來分離。

2 葡聚糖凝膠LH-20洗脫溶劑

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類：反相和正相兩種。用得zui多的是反相溶劑洗脫，以甲醇——水系統(tǒng)zui為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯（仿）——甲醇zui為常見，先用50％氯（仿）——甲醇，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱。

3 樣品的處理和洗脫溶劑的選擇

如果樣品極性大，選用反相溶劑洗脫（甲醇——水），樣品用zui少體積的甲醇——水（盡可能甲醇少一些）溶解，過濾后，濕法上樣（必須要進(jìn)行過濾！否則把葡聚糖凝膠LH-20 堵塞，就必須將葡聚糖凝膠LH-20的柱頭部分棄去，造成不必要的浪費）。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯（仿）——甲醇），樣品用zui少體積的氯（仿）——甲醇溶解，過濾后，濕法上樣。

4 葡聚糖凝膠 LH-20的使用方法

將干粉浸泡于60-70％乙醇中過夜（充分?jǐn)嚢瑁?，洗去可能存在的殘留物，抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱，不能出現(xiàn)凝膠斷層（否則要重新裝柱），動態(tài)用一倍柱體積的60-70％乙醇淋洗，再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止，如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并根據(jù)性質(zhì)確定柱高。如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。

（1） 選擇條件：

梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統(tǒng)；極性小者一般用不含水的系統(tǒng)，常用正己烷（二氯）甲烷甲醇系統(tǒng)。

（2）飽和層析柱：

用洗脫劑將凝膠搖勻，直立柱身，讓其自然沉降，此時要防止氣泡留在其中。至少半小時打開開關(guān)，流出幾個柱體種的洗脫劑，目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。

（3）樣品處理：

用盡量少的洗脫劑溶解樣品，常壓過濾。

（4）濕法上柱：

這也是要有技巧的步驟。
    （5）洗脫：

控制流速，一般1drop/s以下，可參見廠家的一些參數(shù)；必要時更改極性（很多時一個極性就可以將樣品洗脫完畢）。

（6）再生以備下次使用。