免疫酶技術就是用酶(如辣根過氧化物酶)標記已知抗體(或抗原),然后與組織標本在一定條件下反應,如果組織中含有相應抗原(或抗體),抗原抗體相互結合形成的復合物中所帶酶分子遇到底物時,能催化底物水解、氧化或還原,產(chǎn)生顯色反應,這樣就可以識別出標本抗原(抗體)分布的位置和性質(zhì),通過圖像分析并可達到定量的目的。
ELISA試劑盒免疫酶技術與免疫熒光技術
免疫熒光技術雖已廣泛應用于免疫學的研究與診斷,但是熒光抗體染色標本不能長期保存,對組織細胞的細微結構分辨不清,免疫酶技術則能克服上述不足,標記免疫酶技術的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法,對石蠟切片標本尤為適用,為免疫病理研究開辟了一條新途徑,酶顯色產(chǎn)物具有較高的電子密度,經(jīng)過適當處理還可以進行免疫電鏡觀察,免疫酶組化技術分為酶標記法與非標記抗體技術,前者是將酶通過交聯(lián)劑結合在抗體分子上,形成酶標記抗體。后者是將酶作為抗原與相應的特異性抗體連接進行的免疫反應,稱為非標記抗體酶技術。
免疫酶技術利用酶催化底物反應的生物放大作用,提高特異性抗原-抗體免疫學反應檢測敏感性的一種標記免疫技術。該技術所用的酶要求純度高、催化反應的轉化率高、專一性強、性質(zhì)穩(wěn)定、來源豐富、價格不貴、制備成的酶標抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定,繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標本中不存在與標記酶相同的酶。另外它的相應底物應易于制備和保存,價格低廉,有色產(chǎn)物易于測定,光吸收高。
免疫酶技術的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和與標記酶直接關聯(lián)的酶反應底物。可作固相載體的物質(zhì)很多,常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式,在測定過程中,它作為載體和容器,不參與化學反應,加之它的價格低廉,所以被普遍采用。
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